премии и награды

Присуждение Государственной премии Российской Федерации 2003г для молодых ученых за выдающиеся работы в области науки и техники:

Основные этапы разработки

О.И.Скотникова - ведущий научный сотрудник Московского научно-практического центра борьбы с туберкулезом (МНПЦБТ) обратилась к А.С.Заседателеву с вопросом о возможности создания биочипов для выявления лекарственно-устойчивых форм туберкулеза. Предложение было обсуждено с А.Д.Мирзабековым, находившимся в то время в США. А.Д.Мирзабеков решил развивать это направление, добиваясь финансовой поддержки от Аргонской национальной лаборатории (АНЛ).

Организационное совещание в Институте Молекулярной Биологии им. В.А.Энгельгардта Российской Академии Наук (ИМБ). Председатель - А.Д. Мирзабеков. Участники - директор МНПЦБТ проф. В.И. Литвинов, ведущие научные сотрудники. Разработан план работы по созданию экспресс-метода выявления лекарственной устойчивости возбудителя туберкулеза человека.

Группа в составе В.М. Михайловича, А. Ю. Соболева, С. А. Лапы и Д. А. Грядунова приступила к разработке метода гибридизации на биочипах с целью идентификации мутаций в гене rpoB, приводящих к устойчивости к рифампицину. Введение процедуры двустадийной ПЦР с использованием флуоресцентно меченных праймеров как стандарта для получения гибридизационной пробы.

Организована поездка зам. директора АНЛ Х. Дракера в Россию с посещением научных и медицинских центров Петербурга, Москвы, Новосибирска и Иркутска для ознакомления с состоянием противотуберкулезных служб. Принято решение о выделении гранта АНЛ для финансирования в ИМБ и 7-ми противотуберкулезных центрах России работ, направленных на создание ТБ-биочипов.

Создан первый прототип биочипа. Апробован метод выделения ДНК из культур клеток и клинического материала в Московском научно-практическом центре борьбы с туберкулезом. Начато тестирование клинических образцов из Москвы, Санкт-Петербурга, Сибирского региона.

Переход на технологию сополимеризации. Производятся первые пилотные партии РИФ-ТБ биочипов. Начато практическое обучение персонала противотуберкулезных учреждений методу анализа возбудителя туберкулеза на биочипах.

Начало работы по созданию метода гибридизации на микрочипах для видовой дифференциации вирусов оспы. Разработан метода полимеразной цепной реакции на микрочипах с целью видовой дифференциации микобактерий по полиморфизму в гене 16S рРНК и одновременной идентификации мутаций, приводящих к устойчивости Mycobacterium tuberculosis к рифампицину (ген rpoB) и изониазиду (гены katG, inhA, ahpC).

Публикация в Бюллетене экспериментальной биологии и медицины статьи В.М. Михайлович, С. А. Лапа, Д. А. Грядунов с соавт. «Использование методов гибридизации и ПЦР на специализированном TБ-микрочипе для обнаружения рифампицин-резистентных штаммов Mycobacterium tuberculosis.» Начало разработки метода ПЦР на микрочипе для анализа штаммов возбудителя сибирской язвы Bacillus anthracis по полиморфизму в генах рибосомной РНК и генах токсинообразования.

Публикация в "Journal of clinical microbiology". Mikhailovich V, Lapa S, Gryadunov D et al. "Identification of rifampin-resistant Mycobacterium tuberculosis strains by hybridization, PCR, and ligase detection reaction on oligonucleotide microchips."

Внедрение технологии, установка оборудования и начало поставок партий биочипов в Государственный научный центр «Вектор»(Кольцово), Московский научно-практический центр борьбы с туберкулезом, Центральный научно-исследовательский институт туберкулеза РАМН.

Патент РФ N2175015. А.Д. Мирзабеков, В.М. Михайлович, А.Ю. Соболев, Д. А. Грядунов, С.А. Лапа. «Способ определения точечных нуклеотидных замен в ДНК микобактерий, способ диагностики устойчивости микобактерий к рифампицину, биочип для осуществления этих способов.».

Публикация в Докладах академии наук. Д.А. Грядунов, В.М. Михайлович, С.А. Лапа с соавт. «Обнаружение Bacillus anthracis методом мультиплексной ПЦР на олигонуклеотидных биочипах.»

Начало государственных клинических испытаний ТБ-Биочип(РИФ). Разработка метода гибридизации на биочипе с целью идентификации M. tuberculosis и одновременного определения лекарственной устойчивости к препаратам первого ряда - рифампицину и изониазиду.

Публикация в "Journal of clinical microbiology". Sergey Lapa, Maxim Mikheev, Sergei Shchelkunov et al. "Species-Level Identification of Orthopoxviruses with an Oligonucleotide Microchip."

Успешное завершение первого этапа клинических испытаний.

Начало разработки биочипа для одновременной идентификации возбудителя натуральной оспы и ее дискриминации от возбудителей, вызывающих заболевания с клинической сходной картиной.

Выдвижение ученым советом Института Молекулярной биологии РАН работы С. А. Лапы и Д. А. Грядунова «Олигонуклеотидные микрочипы для идентификации микроорганизмов, вирусов, анализа их генов и мутаций, ответственных за патогенность и лекарственную устойчивость» на соискание Государственных премий Российской Федерации 2003 года для молодых ученых за выдающиеся работы в области науки и техники.

Защита диссертаций на соискание степени кандидата биологических наук по специальности «Молекулярная биология». С. А. Лапа. Видовая идентификация ортопоксвирусов и обнаружение мутаций, обусловливающих устойчивость Mycobacterium tuberculosis к рифампицину, гибридизацией на олигонуклеотидных микрочипах Д. А. Грядунов. Разработка методов полимеразной цепной реакции на олигонуклеотидных микрочипах для видовой идентификации микроорганизмов и определения их лекарственной чувствительности

Разработка метода ПЦР на биочипе для одновременной идентификации штаммов возбудителей сибирской язвы, чумы и бруцеллеза.

Демонстрация возможностей ускоренного метода детекции возбудителя оспы и возбудетелей клинически сходных заболеваний.

Начало работы по регистрации в Минздраве биологического микрочипа для одновременной идентификации штаммов туберкулеза, устойчивых к рифампицину и изониазиду - двум основным противотуберкулезным препаратам.

Научные публикации противотуберкулезных центров, подтверждающие высокую эффективность биологических микрочипов.

Публикация в журнале «Молекулярная генетика, микробиология и вирусология». Д.А. Грядунов, В.М. Михайлович, С. А. Лапа с соавт. Идентификация штаммов M. tuberculosis c одновременным определением их лекарственной устойчивости методом гибридизации на олигонуклеотидных микрочипах.

Общественное обсуждение работы, выдвигаемой на государственную премию в Институте Вирусологии РАМН им. Ивановского. Единогласное голосование в пользу выдвижения работы на заключительный этап конкурса.

Передача метода анализа точечных мутаций в геноме возбудителя туберкулеза на биологических микрочипах в две ведущие лаборатории США (CDC, Атланта; UAMS, Литтл Рок).

Получение выписки из протокола заседания Комитета по новой медицинской технике Минздрава РФ об успешном проведении клинических испытаний ТБ-биочипа.

Президент РФ В.В. Путин подписал указ о присуждении Государственной премии Российской Федерации Д.А Грядунову и С.А. Лапе за работу «Олигонуклеотидные микрочипы для идентификации микроорганизмов, вирусов, анализа их генов и мутаций, ответственных за патогенность и лекарственную устойчивость».